• 當前位置:網站首頁新聞中心 > Puromycin 嘌呤霉素 PS610使用說明

    Puromycin 嘌呤霉素 PS610使用說明

    更新時間:2022-12-08 點擊量:642
      Puromycin 嘌呤霉素 PS610是一種由鏈霉菌中獲取的氨基糖苷類抗生素,具有與tRNA分子3’末端類似的結構,可以和核糖體的A位點結合,從而抑制蛋白質合成對革蘭氏陽性菌產生抑制作用??捎米骱Y選含該抗生素的基因質粒,細胞株構建,也可當做抗菌類抗生素使用。
     
      Puromycin 嘌呤霉素 PS610使用說明:
     
      1.轉染前一天鋪HEK293細胞,培養基為含10%FBS的DMEM培養基,以6wellplate為例,細胞數目約為0.5x106cells。
     
      2.在無菌管中加入目的DNA質粒(1-2ug)及無血清的DMEM或者Opti-MEM。
     
      3.在無菌管中加入無血清的DMEM或者VGF轉染試劑4-10ug。
     
      4.將2和3步中的溶液混合,室溫放置20-30min。
     
      5.將4步所得混合液逐滴加入至6wellplate中。
     
      6.轉染48h后,吸棄培養基,加入終濃度為1-10ug/mlPLM-Puromycin試劑的培養基2ml。
     
      7.再培養48h后,觀察細胞狀態,不含嘌呤霉素的細胞會飄起死亡,轉入含嘌呤霉素抗性質粒的細胞則貼壁生長。再次吸棄培養基,加入終濃度為1-10ug/mlPLM-Puromycin試劑的培養基2ml,繼續殺死無嘌呤霉素抗性的細胞。
     
      8.再培養48h,若細胞仍然貼壁生長且幾乎長滿,結果說明我們的目的質粒含有嘌呤霉素抗性基因,否則目的質粒不含嘌呤霉素抗性基因。
     
      注意事項:篩選細胞時,細胞接種密度不能過大,以免影響篩選效率。當細胞密度比較大時,可加本試劑反復篩選,直至對照細胞死亡。建議的一般哺乳動物細胞選用的有效濃度范圍為1-10μg/ml,使用前要做濃度篩選,選擇合適的濃度。
    7777精品伊久久久大香线蕉,亚洲AV秘 无码一区二区三,国产福利姬在线视频,国产骚妇在线视频